毛细管亲和色谱和毛细管电泳用于蛋白-蛋白相互作用研究

	毛细管亲和色谱和毛细管电泳用于蛋白-蛋白相互作用研究
	刘桂真,1,2 ; 徐美 1; 康经武 1
	2019-05-17
会议录名称	中国化学会第十二届全国微全分析系统学术会议、第七届全国微纳尺度生物分离分析学术会议、第七届国际微流控学学术论坛、The 11th International Symposium on Microchemistry and Microsystems摘要集
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摘要	蛋白-蛋白相互作用关系到细胞的分化、增殖、凋亡、自吞噬以及信号转导等一系列过程。为了了解细胞内特定蛋白的功能,就需要研究细胞内的蛋白-蛋白相互作用。为此我们发展了一种用于研究蛋白-蛋白相互作用的毛细管亲和色谱分析方法,用于在蛋白质组学层面快速探测人类细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)。在该方法中,我们建立了一种毛细管亲和色谱整体柱,我们想要鉴定其PPI的重组蛋白质可以通过6*Hi标签Ni(2+)氮基三乙酸(NTA)形成络合物逆地固定在亲和毛细管整体柱上。细胞裂解液通过色谱柱时。固定的蛋白质捕获相互作用蛋白质。洗脱后的,富集到的蛋白质进行SDS-PAGE分离,然后用质谱法和定量蛋白质组学进行分析。该方法用于鉴定涉及自噬相关受体蛋白FYCO1GOLD结构域的PPI。共鉴定了四种潜在的相互作用蛋白,包括两种已知的相互作用蛋白CCZ1和C18orf8和两种新蛋白PYCR1(吡咯啉-5-羧酸还原酶1)和PYCR2。然后用体内串联亲和纯化实验验证鉴定的蛋白质。该方法简单和稳定而且高效,因此可用于各种各样的蛋白-蛋白相互作用的研究。此外,我们还发展了基于毛细管电泳前沿分析(CE-FA)的蛋白-蛋白相互作用抑制剂筛选方法。Bcl-2家族蛋白的相互作用在细胞凋亡过程中具有关键的调节作用,因此成为了新的抗癌药物靶标。我们以Bcl-2家族的抗凋亡蛋白Bcl-XL,截取自促凋亡蛋白Bid的BH3区域的荧光标记的肽段(F-Bid)和已知的Bcl-XL-Bid相互作用抑制剂ABT-263为实验模型建立了筛选方法,并对方法进行了验证。CE-FA采用大体积进样,因此Bcl-XL与F-Bid的平衡体系在电泳分离过程中依然能够保持最初的平衡状态。通过读取加入化合物后F-Bid平台峰峰高的增加即可测定待筛选化合物对Bcl-XL-Bid相互作用的抑制作用。我们将该方法用于中药粗提物的活性跟踪筛选,最终筛选出两种新抑制剂:去甲泽拉木醛和雷公藤红素,通过细胞实验证明这两种化合物具有促进细胞凋亡的作用。
关键词	毛细管亲和色谱毛细管电泳蛋白-蛋白相互作用蛋白-蛋白相互作用抑制剂筛选
会议名称	中国化学会第十二届全国微全分析系统学术会议、第七届全国微纳尺度生物分离分析学术会议、第七届国际微流控学学术论坛、The 11th International Symposium on Microchemistry and Microsystems
会议地点	中国陕西西安
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语种	中文
原始文献类型	国际会议
来源库	CNKI
文献类型	会议论文
条目标识符	https://kms.shanghaitech.edu.cn/handle/2MSLDSTB/350121
专题	物质科学与技术学院_博士生
作者单位	1.生命有机国家重点实验室中国科学院上海有机化学研究所; 2.上海科技大学物质学院
第一作者单位	上海科技大学
推荐引用方式 GB/T 7714	刘桂真,,徐美,康经武. 毛细管亲和色谱和毛细管电泳用于蛋白-蛋白相互作用研究[C],2019:1.