一种限制性内切酶的制备方法

	一种限制性内切酶的制备方法
翻译题名	A process for preparing restriction endonuclease
申请号	CN202210262350.X
	2023-03-17
公开（公告）号	CN115806958A
公开日期	2023-03-17
摘要	本发明公开了一种限制性内切酶的制备方法。所述方法包括如下步骤：1)合成限制性内切酶编码基因、含有启动子的片段和含有终止子的片段；将所述含有启动子的片段、所述编码基因和所述含有启动子的片段连接，获得线性表达模板；2)在无细胞表达体系中表达所述线性表达模板，得到所述的限制性内切酶；所述线性表达模板不含有限制性内切酶的酶切位点。本发明能有效解决传统技术中需要共表达相应的甲基转移酶且难以获得有生物活性的限制性内切酶的难题，采用本发明的制备方法来制备限制性内切酶，其表达时间仅仅需要3～6h，蛋白纯化时间仅仅需要5～6h，提高制备效率的同时获得的限制性内切酶的比活跟商业酶相似，具有广阔的应用前景。
翻译摘要	The present invention discloses a preparation method of restriction endonuclease. The method comprises the steps of : 1) synthesizing a restriction endonuclease-encoding gene, a promoter-containing fragment and a terminator-containing fragment; Connecting the promoter-containing fragment, the coding gene and the promoter-containing fragment to obtain a linear expression template; 2) expressing the linear expression template in cell-free expression system to obtain the restriction endonuclease; The linear expression template does not contain restriction endonuclease cleavage sites. Said invention can effectively solve the difficult problems of need of coexpression of correspondent methyltransferase and difficult to obtain restriction endonuclease with biological activity in traditional technology, When the preparation method is used for preparing the restriction enzyme, the expression time is only 3-6 hours, the protein purification time is only 5-6 hours, the specific activity of the obtained restriction enzyme is similar to that of a commercial enzyme while the preparation efficiency is improved, and the method has a wide application prospect.
当前权利人	上海科技大学
专利代理人	聂月美 ; 许亦琳
代理机构	上海光华专利事务所(普通合伙) 31219
专利申请人	上海科技大学
	李健; 刘晚秋; 季向阳
公开国别	中国
公开国别简称	CN
IPC 分类号	C12N9//22; C12N15//70; C12N15//55
CPC分类号	Y02A50//30
专利有效性	审中
专利类型	发明申请
专利类型字典	1
当前法律状态	实质审查
简单同族	CN115806958A
扩展同族	CN115806958A
INPADOC 同族	CN115806958A
文献类型	专利
条目标识符	https://kms.shanghaitech.edu.cn/handle/2MSLDSTB/294737
专题	物质科学与技术学院_PI研究组_李健组物质科学与技术学院_博士生
作者单位	上海科技大学
推荐引用方式 GB/T 7714	李健,刘晚秋,季向阳. 一种限制性内切酶的制备方法. CN202210262350.X[P]. 2023-03-17.